medios de cultivo

Medio de cultivo básico

Medio MS: Es un preparado comercial que contiene las distintas sales mezcladas y listas para ser disueltas en medio líquido. Cuando se disuelven en la cantidad adecuada, la concentración final de los distintos nutrientes minerales es la mostrada en la Tabla 1.

Tabla 1. Concentración de sales minerales de la disolución nutritiva diseñda por Murashige-Skoog

Sales de macronutrientes (mg·L-1)		Sales de micronutrientes (mg·L-1)
NH4NO3	1650	KI	0.83
KNO3	1900	H3BO3	6.2
CaCl2·2H2O	440	MnSO4·4H2O	22.3
MgSO4·7H2O	370	ZnSO4·7H2O	8.6
KH2PO4	170	Na2MoO4·2H2O	0.25
		CuSO4·5H2O	0.025
		CoCl2·6H2O	0.025
		Na2·EDTA	37.3

Medio de cultivo con fitohormonas y kanamicina

Para comprobar el efecto de una aplicación exógena de hormonas sobre el desarrollo del explanto vamos a preparar distintos medios de cultivo, donde la concentración de fitohormonas será distinta, siguiendo el esquema de la Tabla 2. Se parte de disoluciones stock concentradas, que se añadirán para preparar 500 mL de medio por grupo. Este volumen de medio es suficiente para preparar al menos 20 placas Petri por grupo.

·         Auxina (termolábil, STOCK 1000 v.c.): ácido naftalénacético (NAA) 3 g·L^-1

·         Citoquinina (termolábil, STOCK 1000 v.c.): bencilaminopurina (BAP) 1 g·L^-1

·         Kanamicina (termolábil, STOCK 1000 v.c.): 50 g L^-1

Tabla 2. Medios de cultivo a preparar por los distintos grupos de trabajo, en los que se variará la proporción de fitohormonas y la presencia o ausencia de kanamicina. Los volúmenes de los stock de fitohormonas se han calculado para preparar 500 mL de medio de cultivo.

Medio	Kan	Conc. final (mg·L-1) auxina:citoquinina	NAA	BAP	Kan	Grupo
	(mg L-1)		(µL)
Alta auxina (AA)	NO	3.0 : 0.0	500	0	0	1
Media aux. (MA)	NO	1.5 : 0.5	250	250	0	2
Baja aux. (BA)	NO	0.5 : 3.0	85	1500	0	3
AA + kanamicina	50	3.0 : 0.0	500	0	500	4
MA + kanamicina	50	1.5 : 0.5	250	250	500	5
BA + kanamicina	50	0.5 : 3.0	85	1500	500	6